傳統(tǒng)的質(zhì)粒生產(chǎn)避不開大腸桿菌的發(fā)酵，在商業(yè)化生產(chǎn)過程中會(huì)遇到一些挑戰(zhàn)，比如質(zhì)粒上含有無關(guān)序列，如抗生素篩選基因、復(fù)制起始點(diǎn)等，影響質(zhì)粒的產(chǎn)量；整個(gè)過程涉及發(fā)酵、提取、純化、QC等多個(gè)環(huán)節(jié)，耗時(shí)長，成本高；此外，可能會(huì)發(fā)生大腸桿菌和質(zhì)粒DNA的基因重組，造成安全性事件。
體外酶法合成DNA載體可以有效替代傳統(tǒng)的質(zhì)粒DNA生產(chǎn)，完美避開生物發(fā)酵過程的諸多不可控風(fēng)險(xiǎn)，且生產(chǎn)工藝更簡單可控，可在更短的時(shí)間內(nèi)完成商業(yè)化生產(chǎn)，在細(xì)胞與基因治療領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用場景。愷佧生物基于獨(dú)有的新型功能重組蛋白和高活性蛋白酶類研發(fā)生產(chǎn)平臺(tái)SAMSTM，開發(fā)出了一系列高活性的酶產(chǎn)品用于體外合成DNA載體。
phi29 DNA polymerase具有很強(qiáng)的鏈置換活性和連續(xù)合成的能力，在體外合成長的雙鏈DNA。此外，該酶具有較強(qiáng)的 3’- 5’ 核酸外切酶活性，其保真性遠(yuǎn)高于絕大多數(shù) taq 酶，確保了 DNA 合成的高保真性。
注:在某些應(yīng)用場景下，使用此酶會(huì)有專利限制
TelN Protelomerase具有切割-連接活性，可用于合成線性閉合mini DNA載體，其在識(shí)別位點(diǎn) TelRL（56bp）切割雙鏈DNA，并在酶切位點(diǎn)處留下共價(jià)封閉的發(fā)夾結(jié)構(gòu)，有效地將環(huán)狀DNA轉(zhuǎn)化為有發(fā)夾末端的線性DNA。在實(shí)際應(yīng)用中會(huì)將質(zhì)粒上的目的片段和骨架序列通過TelRL位點(diǎn)進(jìn)行間隔。
注:TelRL底物序列需要專利授權(quán)
Fig. 1 TelRL位點(diǎn)
| 貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | |
| PHI-BE101 | phi29 DNA Polymerase | 500 U/5000 U | 立即詢價(jià) |
| TLN-BE001 | TelN Protelomerase | 10 kU/50 kU | 立即詢價(jià) |
| BSA-EE101 | BsaI | 1000 U/5000 U | 立即詢價(jià) |
| GMP-BSA-EE101 | BsaI(GMP grade) | 20 kU/400 kU | 立即詢價(jià) |
| BSP-BE101 | BspQI | 1000 U/10 kU | 立即詢價(jià) |
| SAP-SE101 | SapI | 1000 U/10 kU | 立即詢價(jià) |
| XBA-EE101 | XbaI | 2000 U/20 kU | 立即詢價(jià) |
| EXO-EE101 | Exonuclease III | 500 U/5000 U | 立即詢價(jià) |
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