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基因編輯工具
· 基因編輯技術已歷經幾代革新，從最初的ZFNs(zinc-finger nucleases)技術、TALENs (transcription activator-like effector nucleases)技術到CRISPR-Cas技術，再到BE(base editing)技術及PE(prime editing)技術等，極大地提高了人類對真核細胞的基因組進行精準改造的能力，也為治愈各類疾病提供了可能。
· 由于設計和操作方面的便捷性，CRISPR-Cas系統成為當前應用最為廣泛的基因編輯技術，此技術涉及到的核酸酶有Cas9、Cas9n、Cas12a和hfCas12Max?等，其中Cas9在PAM序列的上游3-4bp處切割DNA，Cas12a切割雙鏈DNA后形成4-5個核苷酸突出的5’粘性末端；hfCas12Max?也以交錯方式切割，形成5’粘性末端。
· BE技術是基于脫氨酶與CRISPR-Cas9系統融合形成的技術。主要有胞嘧啶堿基編輯器（CBE）、腺嘌呤堿基編輯器（ABE）等，可實現單個堿基對的轉換。
愷佧生物隆重推出GMP級Cas9核酸酶以及高活性的AsCas12a和hfCas12Max?等一系列基因編輯酶！其中，Cas9核酸酶已完成DMF備案（編號：036578），并已協助客戶完成IND申報。 若您使用愷佧生物Cas9核酸酶用于細胞與基因治療項目的藥物開發，在進行新藥注冊的監管備案文件中可直接引用我們的DMF 編號，從而加快藥品審查。此外，我們還可提供科研級&GMP級CBE——BS-EP1(商品名：AccuBase?)，將C·G堿基對替換為T·A堿基對，實現基因的修正、激活、沉默等以達到治療疾病的目的。
Cas9 Nuclease(GMP grade)
產品特點
質量要求
產品應用
在細胞與基因治療領域，用于造血干細胞和免疫細胞的基因修飾
產品數據
01 純度
SEC-HPLC
Fig. 1 SEC-HPLC檢測Kactus Cas9核酸酶的純度高于95%
RP-HPLC
Fig. 2 RP-HPLC檢測Kactus Cas9核酸酶的純度高于95%
02 活性
體外切割活性檢測
Fig. 3 Cas9核酸酶體外切割DNA性實驗，三批次的Cas9核酸酶的體外切割效率基本相當。
細胞水平活性檢測
Fig. 4 Cas9核酸酶用于293T細胞、Jurkat細胞、T細胞的基因敲除，其在不同細胞中的基因敲除效率與競品相當。
Cas9 (CRISPR Associated Protein 9) ELISA Kit
在ex vivo基因治療中,細胞經CRISPR-Cas9系統改造后，在回輸人體之前需對胞外或胞內Cas9核酸酶的殘留進行檢測。
愷佧生物精心開發了高靈敏的殘留檢測試劑盒Cas9 (CRISPR Associated Protein 9) ELISA Kit，其靈敏度可達0.125 ng/ml。
Fig. 5 Cas9 (CRISPR Associated Protein 9) ELISA Kit檢測原理
Fig. 6 標準曲線繪制示例
01 準確度
稀釋緩沖液中加樣回收率檢測
Fig. 7 在稀釋緩沖液中檢測三個不同濃度的Cas9核酸酶分析樣本的回收率，結果顯示回收率介于80%-120%，表明試劑盒在稀釋緩沖液中檢測Cas9核酸酶的準確度高。
02 精密度
使用同一批次檢測高中低三種不同濃度的Cas9核酸酶樣本，每個樣本重復測試10次，結果顯示每批次試劑盒檢測不同濃度樣本的CV都小于10%，表明試劑盒具有良好的批內重復性。
使用三批次劑盒檢檢測高中低三種不同濃度的Cas9核酸酶樣本，共檢測30次，結果顯示每種樣本三個批次間的CV值都小于15%，表明試劑盒具有良好的批間重現性。
AsCas12a Nuclease
產品數據
SEC-HPLC
Fig. 8 SEC-HPLC檢測AsCas12a 核酸酶的純度高于95%
體外切割活性
Fig. 9 經體外切割實驗驗證，AsCas12a 核酸酶可以靶向切割95%以上的底物。
hfCas12Max?
hfCas12Max?是輝大基因（HuidaGene）開發的新型的DNA基因編輯工具酶，愷佧生物獲得hfCas12Max?在大中華區研究級蛋白的生產銷售排他許可，以及GMP級產品的生產銷售普通許可。hfCas12Max?是對xCas12i DNA編輯工具進行蛋白工程化改造、篩選及驗證，開發出的高保真變體，相較傳統的Cas9和Cas12，hfCas12Max?具有更寬泛的PAM識別和更高效的編輯效率，且相當或更低的脫靶效應。
產品數據
TIDE分析基因敲除效率
Fig.10 hfCas12Max? RNP電轉CD3+ T細胞后，TIDE分析B2M和TRAC基因敲除效率均超過90%。
流式細胞術分析基因敲除效率
Fig. 11 經流式檢測，由hfCas12Max? 介導的基因編輯系統可以高效地同時敲除CD3+ T細胞中的B2M和TRAC基因，雙基因敲除效率超過90%。
BS-EP1(商品名：AccuBase?)——新型CBE
BS-EP1(商品名：AccuBase?)是通過基因工程手段設計的CBE，由 Cas9 Nickase、脫氨酶、UGI 融合而成，可以在 3-12 窗口范圍內進行有效編輯(遠離 PAM 的為第1位)，將窗口范圍內的 C 脫氨形成 U，U利用細胞內修復機制轉變為 T，從而實現C→T的轉變，并且在編輯的過程中不會引入 DNA 雙鏈斷裂（Double-Strand Break，DSB），確保了編輯的安全性。
AccuBase? 的結構經過巧妙的設計，創造性地將脫氨酶可逆的包裹起來，只有當 sgRNA 與靶位點結合時才能發揮脫氨作用，大幅度降低了與非靶 DNA 的隨機結合，可以實現接近零脫靶的效果，同時維持了高效的編輯活性。愷佧生物基于Structure Aided Design and Multiplex Screening SAMSTM平臺，通過對AccuBase?蛋白的表達工藝、純化工藝、制劑配方開發等一系列步驟的篩選和優化，最終制備出高穩定性、高純度和高活性的CBE堿基編輯器。
AccuBase? 的結構經過巧妙的設計，創造性地將脫氨酶可逆的包裹起來，只有當 sgRNA 與靶位點結合時才能發揮脫氨作用，大幅度降低了與非靶 DNA 的隨機結合，可以實現接近零脫靶的效果，同時維持了高效的編輯活性。愷佧生物基于Structure Aided Design and Multiplex Screening SAMSTM平臺，通過對AccuBase?蛋白的表達工藝、純化工藝、制劑配方開發等一系列步驟的篩選和優化，最終制備出高穩定性、高純度和高活性的CBE堿基編輯器。
Fig. 12 AccuBase?工作示意圖（左:未編輯狀態 右:編輯狀態）
產品數據
SEC-HPLC
Fig. 13 SEC-HPLC檢測 AccuBase?純度高于80%
TIDE分析編輯效率
Fig. 14 使用AccuBase?分別敲除原代T細胞的PDCD1, TRAC和B2M基因，經TIDE分析，AccuBase?對三個基因的敲除效率均超過80%。
流式細胞術分析編輯效率
Fig. 15 使用AccuBase?分別敲除原代T細胞膜上的PDCD1, TRAC和B2M基因，經流式分析，在蛋白水平上，AccuBase?對PD1和B2M的敲除效率超過80%，對TRAC的敲除效率達到96%。
產品列表
| 貨號 | 產品名稱 | 規格 | |
| KACTUS-CAS9 | Cas9 Nuclease | 1 mg/3 mg | 立即詢價 |
| KACTUS-CAS9-GMP | Cas9 Nuclease (GMP grade) | 3 mg | 立即詢價 |
| CAS-MM00B | Cas9 (CRISPR Associated Protein 9) ELISA Kit | 96 T | 立即詢價 |
| CAS-EE111 | SpCas9 D10A Nickase | 1 mg | 立即詢價 |
| CAS-EE121 | AsCas12a Nuclease | 1 mg | 立即詢價 |
| CAS-EE128 | hfCas12Max? | 500 μg/1 mg | 立即詢價 |
| KD-0001 | BS-EP1（Trade name: AccuBase?） | 200 μg/500 μg/1 mg | 立即詢價 |
| GMP-KD-0001 | BS-EP1（Trade name: AccuBase?), GMP grade | 1 mg | 立即詢價 |
| ACB-EE00B | AccuBase? ELISA Kit | 96 T | 立即詢價 |
